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一代测序


1常规3730测序

公司采用全新的3730XL测序仪,可以高自动化操作,2小时左右即可达到测序要求;液体分离胶使读序长度达1100bp,精确读长达800bp。利用Seqence5.2新型碱基识别与质量评分软件,测序准确性有了极大的提高;电泳温度可达70C,有效去除二级结构的影响;双色激光两侧同时激发,使得灵敏度极高,荧光信号强度高度均匀,提高了测序模板DNA的浓度的适应范围并且能进行超速测序。 

公司测序特点及优势

高素质测序队伍:测序人员都是经过了严格培训;熟练掌握所有测序仪器和测序相关实验,认真负责的工作态度,绝不把实验交给实习生,保证差错率做到最小甚至杜绝!

测序速度快:菌和PCR未纯化收到样品后36小时内出结果;质粒和PCR已纯化24小时出结果。

价格合理: 根据不同样品定出不同价格,有价可以测,有样品就可以测,用最优惠最合理的价格充分配合你的实验和经费。

困难模板服务:高GC,发夹结构,POLY结构等,根据不同模板做出不同测序方案,量身定做,使你在测序中节省更多时间,实验顺利进行。

保密性强:交给我们东西无原则绝对保密。

测序收费约定:


现象描述

可能原因

是否收费

菌培养不好或失败

挑克隆有误,菌污染,订单提供信息有误

质粒抽提不成功

质粒太大或活化方式不好、转化不好、拷贝数低、培养方式不当

测序无信号、信号弱

引物与模板结合不好(引物或模板原因)

鉴定质粒或PCR浓度低,取消实验

建议PCR(20ul) 、质粒(30ul)去离子水溶解

设计引物和序列拼接

大片段测序

抽提出质粒但测序不成功

引物与模板结合不好(引物或模板原因)

测序杂峰

引物不纯,模板不纯

信号中断或衰减

高级结构,GC rich,重复序列。

测序双峰

非单克隆、杂合子、引物特异性差、重复序列、Poly(A/T/G/C)结构、PCR非特异性扩增

空载体

插入失败,培养过程中片段丢失

客户提供引物导致结果不理想

引物不纯,引物不合适测序

PCR原液纯化后但测序不成功

引物与模板结合不好(引物或模板原因)

收纯化费,不收测序费

测序收费价格(参考)


类型

价格

3730测序(5000-1w以上反应)

14元/反应

3730测序(1000-4999反应)

16元/反应

3730测序(1000以下,不低于96个/批

18元/反应

3730测序(批量样品>48个

20元/反应

3730测序(零散样品,小于48个)

25元/反应

PCR纯化

5元/反应

引物合成

1.3/bp

测序样品要求

PCR原液:片断通常大于200bp;提供浓度大于50ng/ul,体积大于50ul;2ul电泳检测主带清晰。

PCR已纯化:PCR产物溶于超纯水中;浓度大于30ng/ul,体积大于20ul;电泳检测条带单一。

质粒 :质粒浓度大于100ng/ul,体积大于20ul;大质粒需要注明载体长度。

菌液模板要求:说明载体的抗性,我们提供Amp 、kan、chl、tet四种抗生素;

于低拷贝质粒请直接提供1ug纯化质粒;

提供1ml左右的过夜培养菌液,于离心管中封口保存,防止交叉污染或泄漏,特别是热天路远的最好加15%的甘油,这样处理一下以免菌死掉。

建议尽量提供穿刺培养的菌种,或用新鲜的菌装到冰盒里运输

引物要求:浓度大于3.2umol/l,体积大于20ul;

随机引物、兼并引物或碱基长度大于30bp不适合测序;

尽可能提供引物全序列,PCR退火温度;.

T7、SP6、M13(+)、M13(-)、T3等通用引物我们免费提供。

样品类型及注意事项

样品类型

标准

注意事项

500-1000ul新鲜菌液

可以提供5ml菌液或沉淀菌体直接提取质粒

质粒

浓度要求大于100ng/ul,大于20ul(反应个数多相应增加)

建议送前鉴定浓度。建议不要溶于TE,要溶于超纯水。因为TE离子浓度很高,抑制测序反应,建议纯化后溶于15-20ul超纯水中

PCR已纯化

浓度要求大于50ng/ul,20ul左右(反应个数多相应增加)

建议送前鉴定浓度。请注意我处是取2ul原液用1%琼脂糖胶鉴定,客户经常会取5ul鉴定。建议纯化后溶于15-20ul超纯水中

PCR未纯化

浓度要求大于50ng/ul,大于50ul(不宜分离相差小于150BP的多个片段)

建议送前鉴定浓度。请注意我处是取2ul原液用1%琼脂糖胶鉴定,客户经常会取5ul鉴定。如浓度过低我们会直接停止实验,通知客户重供样。