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单细胞测序


简介:

      单细胞基因组测序是基于单个细胞水平上采取高质量的全基因组扩增与测序相结合的一项新技术,用于揭示细胞群体差异和细胞进化关系。该技术目前主要应用于肿瘤发生机制及胚胎发育研究。由于肿瘤细胞之间具有异质性,采用该项技术不需培养细胞,可最真实的获得单克隆癌细胞的具体突变来源及精准的突变频率,以及区分癌症发生、发展、演化过程中的主动与被动突变等。

一、生物信息分析

1. 原始数据整理、过滤及质量评估

2. 基因组重测序和外显子测序分析:
    ♦与参考基因组比对
    ♦SNPs和InDel的检测
    ♦SNPs和InDel的注释

3. 根据客户需求进行个性化分析

二、样品要求

组织样品:必须是在手术切除后立即冷冻保存(液氮或-80℃),保存时间在一年之内;对于肿瘤样品所取样品大小建议为1-2cm3(过大不利于样品的冻存,过小则不能满足取样用量),对难取样或珍贵的标本,样品大小至少5mm3。

全血(或骨髓)样品:不少于5mL,需用抗凝采血管取样和抗凝管分装,并且在-80℃保存;
细胞悬液或细胞系:建议细胞数不少于105个,需按照细胞冻存的标准操作,使用细胞冻存液梯度降温保存于液氮或-80℃;
单细胞样品:细胞分选入装有3~5μl PBS缓冲液的200μl PCR管中, 送样细胞应经过以下步骤处理,确保无金属离子影响实验:
1、加500 ul PBS到100 ul细胞悬液中,4000 g离心5 min;
2、去上清,加500 ul PBS溶液重悬细胞; 
3、1400 g离心5 min;
4、重复步骤 b, c;
5、去上清,加100 ul PBS重悬细胞。
细胞分离完成后,在10min内放入-80℃(冰箱、液氮均可)或者-20℃保存,但-20℃保存不得超过3hours。每个需测序细胞建议送3-5管重复,保证后续实验成功率。 


三、产品优势

· 1、技术稳定、重复性高;
 ·   2、可检测>95%基因组位点;
· 3、极低扩增错误率(<10-6)。